很多同學包病毒的時候一般照著protocol就能完成了，但是卻不知道那些plasmid包括了病毒需要哪些原件。今天給大家科普一下。

用的最廣的是

二代包病毒系統

，通常由三個部分組成：

Packaging plasmid：比如 psPAX2，其中包括HIV

gag, pol, rev,

tat

tat是用來啟用

transfer plasmid

Envelop plasmid： 比如pMD2。G，裡面包括

VSV-G

Transfer plasmid：兩段LTR中間，夾著promoter驅動的cDNA或者shRNA

其中5‘LTR需要靠tat的表達才能啟用下游

對於shRNA來說，用的promoter一般是U6或H1，可以驅動Pol

III。

對於cDNA來說，用的promoter一般是CMV或者RSV，可以驅動Pol

II。

接下來是三代包病毒系統，它比二代更加安全，效率卻沒有二代高。

為什麼說它更加安全了呢？

這就要說到

病毒感染

的本質了。

它的本質是把自己的序列整入宿主的序列。

如果只有transfer plasmid中的序列整入進宿主的話，那麼它是無法再次變成病毒的，因為其他packaging和envelop的序列沒有被整入。

如果要想讓宿主自己產生病毒，需要滿足一個很艱難的條件，就是要把transfer，packaging和envelop三個plasmids中的序列

同時recombine進入宿主

。

那為什麼說三代更安全呢？

因為三代裡把packaging分成了兩個部分，一個有Rev，另一個有Gag和Pol。

因此所有plasmid加在一塊後，就有四個plasmids了，進而加大了四個同時recombine的難度。

同時，透過修改transfer中的5’LTR使其不再依賴HIV tat來啟用下游，三代系統摒棄了packaging裡面的tat，因此安全係數進一步提升。

這裡注意一下，如果你的vector是三代的（即有不需要依賴tat啟用的5‘LTR），那麼有沒有tat都無所謂，所以二代系統三代系統都能用。

但如果你的vector是二代的，也就是正常的5’LTR，你還是需要tat的表達的，因此只能用

二代系統

。

問答時間

Lentivirus 和retrovirus有什麼區別呢？

Lenti是retro的一種，要真說和標準retro的區別的話，那麼就是lenti可以感染

non-dividing

和dividing的細胞，而retro只能感染dividing的細胞，所以lenti的作用更廣。

二者都用gag，pol，rev來package，但是因為是不同的病毒，所以用的會有細微的差別（不同的isoform）。

2。 你直接用你的lentivector做一個瞬轉成不成？

答案是不推薦。因為很可能由於LTR（比如二代的需要依賴tat），沒有tat的情況下，基因表達量會很低。

最後給大家上一個transfer plasmid中lentivirus原件的表格，對於構建一個transfer plasmid很有用哦。

是不是很簡單呢？科科。

Reference

Addgene Lentiviral Guide