34781124162021-11-04 08:44:16

1、引物長度一般在15-30bp。常用的為18-27bp，因為過長會導致其延伸溫度大於74℃，不適於Taq DNA聚合酶進行反應。

2、引物GC含量一般為40%-60%， 45-55%為宜，GC含量過高或過低都不利於引發反應，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近，一般Tm值不超過5℃。

3、引物所對應的模板序列的Tm值在55-80℃之間，最好為72℃左右。

4、引物的延伸是從3′端開始的，不能進行任何修飾，且 3’端的鹼基一般不用A；引物3’端出現3個以上的連續鹼基，如GGG或CCC，或者引物3’端的互補、二聚體或髮夾結構也可能導致PCR反應失敗。

5、鹼基要隨機分佈，且引物自身和引物之間不能有連續4個鹼基的互補。

6、儘量在基因的編碼區（CDS序列）上設計引物，限制基因組DNA擴增。

7、使用BLAST檢索，確認引物特異性。