pcr為什麼加甘油?張裕華4422021-10-15 13:00:52

甘油能降低高G+C區域的二級結構,能促進長距離PCR和提高標準PCR方法的反應專一性。此外,有報導在多重PCR(O。Henegariu等,Biotechniques,1997,23504)和等位專一PCR(R。S。Cha等,PCR Methods and Applications,1992,214)反應液中新增甘油。上述研究有二個共同特點,垍頭條萊

第一,甘油濃度較低通常為5-10%(V/V,下文中未指明的均指體積百分比),文獻報導的最高濃度為20%(Y。H。Liu等,Trends in Gentics,1993和S。Vilcek,Journal Virological Methods,1993,41245) 萊垍頭條

第二,新增甘油後變性溫度包括首次和迴圈變性均仍採用常規的94或95℃。尚未有文獻或專利將甘油濃度擴充套件至20-45%,並且將含5-45%甘油的PCR反應的首次變性溫度提高到大於95℃至98℃,迴圈變性溫度降低到小於94℃至60℃的報道。萊垍頭條

在一管法RT-PC方面,至今僅有一篇文獻(T。W。Myers等,PCR Strategies,p。58-68,Ed。M。A。Innis等,1995)在反應液中新增3%甘油,加上原來由DNA聚合酶和反轉錄酶試劑帶進的2%甘油,使PCR能在含5%甘油反應液中進行。未有將一管法RT-PCR反應液的甘油濃度擴充套件至5-25%的報道。萊垍頭條