未經許可，謝絕轉載

1） ImageJ下載地址：

https：//

imagej。nih。gov/ij/downl

oad。html

2） 開啟ImageJ；

3） 開啟檔案：

File – Open 選擇一個GFP圖 / 將圖片檔案拖拽到ImageJ工具欄；

4） 將偽彩圖轉成點陣圖：

Image – Type – 8-bit；

5） 背景去噪，調整不平的背景面：

Process – SubtractBackground…；

可選引數：

Rolling Ball Radius – 不屬於背景的圖形的曲率最大值，區分背景和標記物的引數；

Light Background：調整為背景淺色標記物深色；

Created Background：只顯示背景影象；

6） 增強對比度：

Process – Enhance Contrast；調整對比度

7） 去噪點，取盡所有細胞點：

Image – Threshold； 調整係數；

8） 劃分開重疊的細胞：

Process – Binary – Watershed；

9） 計數：

Analyze – Analyze Particles；

可選引數：

Size（pixel^2）：納入統計的畫素點大小範圍；

Circularity：畫素點趨於圓形的程度，Circularity=1代表只統計圓形的畫素點

Show-outline ： 顯示被統計的細胞輪廓與計數，用於確認被統計的細胞、是否成功區分重疊細胞，是否摻雜統計了噪音畫素點等等； 可選引數：

Show-bare outlines；只顯示輪廓不標記數目；

Show-Masks：被標記的輪廓被填充滿；

Display result：顯示統計結果；

Clear result：清楚原先的結果；

Exclude on Edges： 分佈在邊界的標記物不被計數；

Include Holes：孔樁標記物一併被計數；

10） Summary視窗讀取結果。

PS： 在步驟8時，如果出現提示，說明圖片格式不符，可透過“Process-Binary-Make Binary”解決

最後，不同熒光圖片處理過程會有小差異，出現一些不同的問題，只需要掌握幾個關鍵選項的功能即可靈活解決。參考 ImageJ User Guide 使用說明。